1. FUNDAMENTO
CATALASA: La mayoría de las bacterias aerobias y
anaerobias facultativas sintetizan esta enzima, la catalasa hidroliza el peróxido
de hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso, que se libera formando burbujas. A excepción de Streptococcus y Enterococcus.
OXIDASA: Las bacterias aerobias y algunas
anaerobias facultativas sintetizan la enzima citocromooxidasa, que en presencia
de oxigeno oxida la fenilendiamina y forma indofenol, que es un compuesto color
violeta.
2. OBJETIVO
Averiguar
si en las bacterias sintetizan catalasa y oxidasa.
3. MATERIAL Y REACTIVOS
Bacteria
3 y 7.
Asa de
siembra, gradilla, mechero bunsen, portaobjetos y tubos de hemólisis.
Tiras reactivas
para oxidasa y peróxido de hidrógeno.
4. PROTOCOLO
·
Prueba de la catalasa
1. Depositar unas gotas de peróxido de hidrógeno en un tubo.
2. Coger un inóculo de la bacteria y ponerlo en el
tubo.
3. Esperar 15- 20 s y efectuar la lectura: si se
forman burbujas la catalasa es positiva; si no se forman burbujas la catalasa
es negativa.
Para hacerlo en porta, primero se pone el inóculo y después
una gota de peróxido de hidrógeno sobre él.
·
Prueba de la oxidasa
1. Depositar una colonia sobre la zona reactiva de
la tira y frotarla con el asa.
2. Esperar 10-30 s y efectuar la lectura: si la zona
de reacción se pone de color azul-violeta la oxidasa es positiva; si la zona de
reacción no cambia de color es oxidasa negativa.
5. MEDIDAS DE SEGURIDAD
1.
Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables.
2.
Lavarse las manos con agua y jabón cada vez que iniciemos y finalicemos las
prácticas.
3.
La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Desinfectar la
superficie de trabajo antes y después de realizar el trabajo.
4.
Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama.
5.
Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar.
6.
Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la
boca, nariz, ojos, etc. por nuestra propio seguridad.
7.
Prohibido sacar muestras contaminadas del laboratorio.
8.
Extremar la precaución con el encendido del mechero Bunsen y su manipulación. Abrir
las ventanas por si se produce un escape de gas del mechero Bunsen.
6. RESULTADO
CATALASA:
Negativo en las bacterias 3 y 7.
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| Catalasa negativa de la bacteria 7 |
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| Catalasa negativa de la bacteria 3 |
OXIDASA:
negativo en la bacteria 7.
 |
| Oxidasa negativa de la bacteria 3 |
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| Así sería en el caso de que la oxidasa fuese positivo |
