PRACTICA 11: ANTIBIOGRAMA POR EL MÉTODO DE KIRBY BAUER

1. FUNDAMENTO

Se utilizan discos o multidiscos de papel de filtro impregnados con una cantidad específica del antibiótico, que se aplica sobre la superficie del medio (Mueller- Hinton) previamente inoculado con el microorganismo en estudio. 

2. OBJETIVO

Estudiar la sensibilidad a antibióticos.

3. MATERIAL Y REACTIVOS

Asa de siembra, mechero bunsen, pinzas, dos tubos de vidrio, gradilla, asa de drigalsky, dos vasos de precipitado, Micropipetas, puntas, y dos medios de cultivo.
Placa con agar Mueller-Hinton

Escala de Mcfarland.

Bacteria 3 y 7.

Alcohol etanol, SSF y H₂O destilada.

	ANTIBIÓTICO
CIP 5	Ciprofloxacin
CEC 30	Cefaclor
CD 2	Clindamycin
CZ 30	Cefazolin

4. PROTOCOLO  

   

1. Preparamos el material.

2. Echamos SSF en los dos tubos de vidrio.

3. Cogemos un inóculo de la bacteria 3 y lo mezclamos con el SSF, hasta conseguir que se haya disuelto. Repetimos este proceso tantas veces como sea necesario con el fin de conseguir la misma turbidez que el tubo 0´5 de la escala de mcfarland.

4. Ponemos 100µl de la disolución anterior en el centro de la placa con agar Mueller-Hinton y para extenderla usamos el asa de drigalsky que previamente hemos metido en etanol y la hemos pasado por la llama del mechero por flameado.

5. Una vez terminado de extender, volvemos a meter el asa en etanol y la volvemos a pasar por la llama.

6. Ponemos los discos de antibiótico en la placa.  

    

7. Este proceso lo hacemos para la bacteria 3 y 7.

8. A las 24 horas medimos el halo formado alrededor de cada disco y vemos si las bacterias son resistentes o sensibles a ese antibiótico.

5. MEDIDAS DE SEGURIDAD 

1. Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables.

2. Lavarse las manos con agua y jabón cada vez que iniciemos y finalicemos las prácticas.

3. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Desinfectar la superficie de trabajo antes y después de realizar el trabajo con lejía o alcohol (etanol 96°).

4. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama.

5. Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar.

6. Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc. por nuestra propio seguridad.

7. Desechar el material contaminado en los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por el fregador o en la basura común.

8. Extremar la precaución con el encendido del mechero Bunsen y su manipulación. Abrir las ventanas por si se produce un escape de gas del mechero Bunsen.

6. RESULTADO 

• Bacteria 7

CIP 5 tiene una longitud de diámetro de 30 mm y la bacteria es sensible.

CD 2 tiene un diámetro de 30 mm y la bacteria es sensible.

CEC 30 la bacteria es resistente.

CZ 30 la bacteria es resistente.

• Bacteria 3

CIP 5 tiene un diámetro de 30 mm y la bacteria es sensible.

CD 2 la bacteria es resistente.

CEC 30 la bacteria es resistente.

CZ 30 la bacteria es resistente.