PRACTICA 15: PRUEBA DEL AGAR HIERRO DE KLIGUER (KIA)

1. FUNDAMENTO

Es una prueba combinada que se usa para la diferenciación de enterobacterias y que permite determinar: la capacidad de un microorganismo de metabolizar glucosa y lactosa,  la producción o no de gas (hidrógeno o dióxido de carbono) como producto final del metabolismo de los carbohidratos y la producción de ácido sulfhídrico. Contiene:

Glucosa y lactosa, como carbohidratos.

Indicador rojo de fenol, que vira a amarillo en medio ácido.

Tiosulfato de sodio, que es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico.

2. MATERIAL Y REACTIVOS

Asa de siembra, mechero bunsen.

Agar KIA y bacterias 3 y 7.

Composición Agar KIA

3. PROTOCOLO    

1. Sembrar el medio de cultivo, picando en el fondo y extendiendo en forma de zig-zag.

2. Incubar durante 24h a 37ºC.

3. Efectuar la lectura de los resultados:

·         Pico rojo/fondo amarillo: la bacteria fermenta glucosa.

·         Pico amarillo/fondo amarillo: la bacteria fermente glucosa y lactosa.

·         Pico rojo/fondo rojo: la bacteria no fermenta azúcares.

·         Presencia de burbujas o ruptura del medio: la bacteria produce gas.

·         Ennegrecimiento del medio: la bacteria produce ácido sulfhídrico.

4. MEDIDAS DE SEGURIDAD 

1. Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables.

2. Lavarse las manos con agua y jabón cada vez que iniciemos y finalicemos las prácticas.

3. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Desinfectar la superficie de trabajo antes y después de realizar el trabajo con lejía o alcohol (etanol 96°).

4. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama.

5. Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc. por nuestra propia seguridad.

6. Extremar la precaución con el encendido del mechero Bunsen y su manipulación. Abrir las ventanas por si se produce un escape de gas del mechero Bunsen.

5. RESULTADO 

Bacteria 7: pico rojo/fondo amarillo, sólo fermenta glucosa y presencia de burbujas por lo que produce gas.

Bacteria 3: rojo/fondo amarillo, sólo fermenta glucosa.