PRACTICA 10: RECUENTO MEDIANTE LA ESCALA DE MCFARLAND

1. FUNDAMENTO

Los estándares de Mcfarland son patrones de turbidez basados en suspensiones de sulfato de bario.

Consta de 11 patrones, cada uno de los cuales tiene una turbidez comparable a la de una suspensión bacteriana con una densidad determinada.

2. OBJETIVO

Hacer un recuento de las bacterias que hay por ml.

3. MATERIAL Y REACTIVOS

o   Vasos de precipitado, matraz aforado de 50 ml y de 500ml, pipeta de vidrio de 10ml, pim-pum, 11 tubos de 25ml con tapones, gradilla, micropipeta y puntas, varilla de vidrio y contenedor de residuos biológicos.

o   BaCl₂, H₂SO₄ y agua destilada.

4. PROTOCOLO    

·         PREPARACIÓN DE REACTIVOS

1. Preparamos el material en el banco de trabajo.

2. Calculamos la cantidad de cada reactivo que vamos a necesitar.    

V_i x C_i = V_f x C_f

V_i x 100 = 50 x 1´175

V_i  = 0´587 gr de  BaCl₂ y 49´41 ml de H₂O destilada

V_i x C_i = V_f x C_f

V_i x 98 = 500 x 1

V_i  = 5´102 ml de  H₂SO₄ y 494´897 ml de H₂O destilada

3. Para preparar el ácido primero tenemos que echar agua destilada en un vaso de precipitado y a continuación echar el ácido y mezclamos.  

4. Echamos la disolución que tenemos en el vaso al matraz de 500 ml con ayuda de un embudo y una varilla para no salpicar y enrasamos con una pipeta pasteur. 

5. Para preparar el BaCl₂ hacemos lo mismo, primero mezclamos en una vaso de precipitado y luego echamos en un matraz de 50 ml.

·         PREPARACIÓN DE PATRONES

	H2SO4 (1%) ml	BaCl2 (1´175%) ml	Nº bacterias/ ml
0´5	24´875	0´125	1´5 x 108
1	24´75	0´25	3 x 108
2	24´5	0´5	6 x 108
3	24´25	0´75	9 x 108
4	24	1	1´2 x 109
5	23´75	1´25	1´5 x 109
6	23´5	1´5	1´8 x 109
7	23´25	1´75	2´1 x 109
8	23	2	2´4 x 109
9	22´75	2´25	2´7 x 109
10	22´5	2´5	3 x 109

1. Para llenar los tubos primero pipeteamos el ácido con una pipeta de vidrio y con la micropipeta si es necesario y después pipeteamos BaCl₂ con una micropipeta.

Lo hacemos así con todos los tubos y por orden empezando por el tubo de 0´5.

5. MEDIDAS DE SEGURIDAD 

1. Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables. 
2. Lavarse las manos con agua y jabón cada vez que iniciemos y finalicemos las prácticas.   
3. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Desinfectar la superficie de trabajo antes y después de realizar el trabajo con lejía o alcohol (etanol 96°).
4. Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar. 
5. Desechar el material contaminado en los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por el fregador o en la basura común. 
6. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre cremalleras manuales. 
7. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de microorganismos, etc.) se comunicará inmediatamente al profesor. 
8. Cuando trabajemos con ácido siempre lo haremos en la cabina de seguridad, asegurándonos que no esté la luz ultravioleta cuando estemos trabajando.

6. RESULTADO 

En la primera imagen vemos como la turbidez va aumentando en los tubos desde el 0´5 al 10 y en la segunda imagen vemos el contraste del tubo 0´5 con el tubo 10.