PRACTICA 9: TINCIÓN DE WIRTZ-CONKLIN

1. FUNDAMENTO

Teñir las endosporas bacterianas es complejo por su situación, en el interior del cuerpo celular, y por su estructura, con varias cubiertas impermeables. Por ello se requieren tinciones con calor para favorecer la penetración de los colorantes.
La técnica más empleada es la tinción de Wirtz-Conklin, que se practica sobre extensiones fijadas por calor.

2. OBJETIVO

Visualización de endosporas.

3. MATERIAL Y REACTIVOS

Asa de siembra, Mechero bunsen, Portaobjetos, Microscopio, Torunda de algodón

Muestra: bacteria 3, 7, ESP 1 y ESP 2.

Suero fisiológico, Verde malaquita al 5 %, y Safranina al 0´5%.

4. PROTOCOLO    

1. Hacer la extensión de la muestra, poniendo una gota de suero fisiológico con el inóculo.

2. Cubrir los portaobjetos con verde malaquita al 5% y calentarlos por debajo durante 5 min con una torunda con alcohol hasta que emita vapores.

 

3. Lavar con agua destilada.

 

4. Cubrir los portaobjetos con safranina al 0´5% durante 2min.

 

5. Lavar, dejar secar y observar al microscopio.

5. MEDIDAS DE SEGURIDAD 

1. Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables.

2. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado.

3. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama.

4. Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc. por nuestra propio seguridad.

5. Desechar el material contaminado en los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por el fregador o en la basura común.

6. Tenemos que tener preparado un vaso con agua,  para cuando terminemos de usar la llama apagarla metiendo la torunda en el vaso.

6. RESULTADO

Bacteria ESP 1 podemos ver bacilos en cadena en rosa del género Bacillus  y esporas en verde. Es Gram-positiva.

Bacteria ESP 2 podemos ver bacilos en rosa  y esporas en verde. Es Gram-positiva.

 Bacteria 3 podemos ver bacilos en rosa  y esporas en verde. Es Gram-positiva.

Bacteria 7 podemos ver bacilos en cadena en rosa del género Bacillus  y esporas en verde. Es Gram-positiva.