1. FUNDAMENTO
Los estándares de Mcfarland son patrones de
turbidez basados en suspensiones de sulfato de bario.
Consta de 11 patrones, cada uno de los cuales
tiene una turbidez comparable a la de una suspensión bacteriana con una
densidad determinada.
2. OBJETIVO
Hacer un
recuento de las bacterias que hay por ml.
3. MATERIAL Y REACTIVOS
o Vasos de precipitado, matraz
aforado de 50 ml y de 500ml, pipeta de vidrio de 10ml, pim-pum, 11 tubos de
25ml con tapones, gradilla, micropipeta y puntas, varilla de vidrio y
contenedor de residuos biológicos.
o BaCl2, H2SO4
y agua destilada.
4. PROTOCOLO
·
PREPARACIÓN DE REACTIVOS
1. Preparamos el material en el banco de trabajo.
2. Calculamos la cantidad de cada reactivo que vamos
a necesitar.
Vi
x Ci = Vf x Cf
Vi
x 100 = 50 x 1´175
Vi
= 0´587 gr de BaCl2 y 49´41 ml de H2O
destilada
Vi
x Ci = Vf x Cf
Vi
x 98 = 500 x 1
Vi
= 5´102 ml de H2SO4 y 494´897 ml de H2O
destilada
3. Para preparar el ácido primero tenemos que echar agua destilada en un vaso de precipitado y a continuación echar el ácido y mezclamos.
4. Echamos la disolución que tenemos en el vaso al matraz de 500 ml con ayuda de un embudo y una varilla para no salpicar y enrasamos con una pipeta pasteur.
5. Para preparar el BaCl2 hacemos lo mismo, primero mezclamos en una vaso de precipitado y luego echamos en un matraz de 50 ml.
·
PREPARACIÓN DE PATRONES
H2SO4 (1%) ml
|
BaCl2 (1´175%)
ml
|
Nº bacterias/ ml
|
|
0´5
|
24´875
|
0´125
|
1´5 x 108
|
1
|
24´75
|
0´25
|
3 x 108
|
2
|
24´5
|
0´5
|
6 x 108
|
3
|
24´25
|
0´75
|
9 x 108
|
4
|
24
|
1
|
1´2 x 109
|
5
|
23´75
|
1´25
|
1´5 x 109
|
6
|
23´5
|
1´5
|
1´8 x 109
|
7
|
23´25
|
1´75
|
2´1 x 109
|
8
|
23
|
2
|
2´4 x 109
|
9
|
22´75
|
2´25
|
2´7 x 109
|
10
|
22´5
|
2´5
|
3 x 109
|
1. Para llenar los tubos primero pipeteamos el ácido
con una pipeta de vidrio y con la micropipeta si es necesario y después
pipeteamos BaCl2 con una micropipeta.
Lo hacemos así con todos los tubos y por orden
empezando por el tubo de 0´5.
5. MEDIDAS DE SEGURIDAD
2. Lavarse las manos con agua y jabón cada vez que iniciemos y finalicemos las prácticas.
3. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Desinfectar la superficie de trabajo antes y después de realizar el trabajo con lejía o alcohol (etanol 96°).
4. Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar.
5. Desechar el material contaminado en los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por el fregador o en la basura común.
6. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre cremalleras manuales.
7. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de microorganismos, etc.) se comunicará inmediatamente al profesor.
8. Cuando trabajemos con ácido siempre lo haremos en la cabina de seguridad, asegurándonos que no esté la luz ultravioleta cuando estemos trabajando.
En
la primera imagen vemos como la turbidez va aumentando en los tubos desde el
0´5 al 10 y en la segunda imagen vemos el contraste del tubo 0´5 con el tubo
10.
