MICROBIOLOGÍA CLÍNICA: PRACTICA 8: TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN

1. FUNDAMENTO

Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos que les confieren la propiedad de resistir la decoloracíón con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo cual también facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tinción de contraste.

2. OBJETIVO

La tinción de Ziehl-Neelsen es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, usada para la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes.

3. MATERIAL Y REACTIVOS

Portaobjetos, mechero bunsen, asa de siembra.

Muestra: bacteria 3, 7, ARR 1 y ARR 2.

Suero fisiológico, Fucsina fenicada, alcohol clorhídrico al 3-5 %, y azul de metileno.

4. PROTOCOLO

1. Hacer la extensión de la muestra, poniendo una gota de suero fisiológico con el inóculo.

2. Cubrir los portaobjetos con fucsina fenicada y calentarlos por debajo durante 5 min con una torunda con alcohol hasta que emita vapores.

3. Dejar enfriar y lavar con agua destilada.

4. Decolorar con alcohol- clorhídrico durante 2 min.

5. Lavar con agua destilada.

6. Cubrir los portaobjetos con azul de metileno durante 2min.

7. Lavar, dejar secar y observar al microscopio.

5. MEDIDAS DE SEGURIDAD

1. Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables.

2. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado.

3. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama.

4. Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc. por nuestra propio seguridad.

5. Desechar el material contaminado en los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por el fregador o en la basura común.

6. Tenemos que tener preparado un vaso con agua, para cuando terminemos de usar la llama apagarla metiendo la torunda en el vaso.

6. RESULTADO