PRACTICA 6: SIEMBRA POR AGOTAMIENTO EN ESTRÍA

1. FUNDAMENTO

Se basa es descargar totalmente el inóculo cargado en un asa de siembra a lo largo de toda la superficie del medio, de manera que la concentración de la muestra va disminuyendo en distintas zonas de la placa a medida que se va agotando el material del asa. Así, tras la incubación, en la misma placa habrá zonas con distinta densidad de crecimiento.

2. OBJETIVO

Aislamiento de bacterias en cultivos primarios. 

3. MATERIAL Y REACTIVOS

Placa de Petri con Agar nutritivo, asa de siembra estéril desechable, asa de siembra de platino y mechero bunsen.

4. PROTOCOLO    

·         Asa de siembra de platino

1. Cogemos el inóculo y sembramos, haciendo estrías muy juntas en zigzag y esterilizamos el asa en el mechero.

2. Enfriamos el asa en un lateral que no esté sembrado y volvemos a sembrar en zigzag tocando la siembra anterior dos veces y esterilizamos el asa.

3. Repetir el paso anterior.

4. Enfriamos el asa y volvemos a sembrar en zigzag pero esta vez las estrías no tienen que estar tan juntas y sólo tocamos una vez la siembra anterior.

 

·         Asa de siembra esteril desechable

1. Cogemos el inóculo y sembramos, haciendo estrías muy juntas en zigzag, para descargar gran parte de la muestra.

2. Volvemos a sembrar en zigzag si tocar la siembra anterior.

3. Repetir el paso anterior.

4. Volvemos a sembrar en zigzag pero esta vez las estrías no tienen que estar tan juntas sin tocar la siembra anterior.

5. Tiramos el asa de siembra al contenedor de residuos biológicos.

Cuando estamos haciendo la siembra el mechero debe estar encendido parar crear ambiente de esterilidad.

5. MEDIDAS DE SEGURIDAD 

1. Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables.

2. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado.

3. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama.

4. Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc., por nuestra propia seguridad.

5. Desechar el material contaminado en los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente.

6. Prohibido sacar muestras contaminadas del laboratorio.

7. Extremar la precaución con el encendido del mechero Bunsen y su manipulación.

6. RESULTADO 

Con asa de platino.

Conforme a los parámetros macroscópicos hay que decir que las colonias bacterianas que han crecido tienen forma circular y plana, con los bordes lobulados y de consistencia mucosa.

Con asa desechable estéril.

En la primera foto ha crecido demasiadas bacterias porque se ha sembrado mucha muestra, por lo que no se puede apreciar con claridad las colonias. 

En la segunda foto hay menos muestra, por lo que sí que podemos apreciar la formación de colonias de forma puntiforme y plana con bordes lisos y consistencia mucosa.