PRACTICA 4: OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS

·       Tinción vital

1. FUNDAMENTO

Consiste en teñir la muestra problema con colorantes muy diluidos, permitiendo al microorganismo acumular parcialmente el colorante, el cual debe estar muy diluida para que no sea tóxico para las bacterias, y provocar la muerte de los microorganismos.

2. OBJETIVO

Visualizar la estructura, distribución y movimiento de microorganismos vivos.

3. MATERIAL Y REACTIVOS

Asa de siembra, gradilla, agua destilada, matraz aforado de 100ml, Micropipetas y puntas, mechero bunsen, vaso de precipitado, embudo, parafilm, portaobjetos y cubres.

Cultivo de mucosa bucal, suero fisiológico y cristal violeta 1/1000.

4. PROTOCOLO    

Preparación del colorante 100mL de cristal violeta a 1:1000.

1. Preparar todo el material necesario en la mesa de trabajo.
2. Depositar un poco de agua destilada en un vaso de precipitado.
4. Coger 0,1mL (100μL) de cristal violeta con una micropipeta y depositarlo en el vaso de precipitado.

5. Llenar el matraz aforado de 100mL con agua destilada y con lo que hemos depositado en el vaso con la ayuda del embudo. Con la ayuda de la pipeta Pasteur completar hasta 100mL. Y tapar con Parafilm el matraz aforado con la disolución de cristal de violeta.

Preparación de la muestra y observación.

1. Preparar todo el material necesario en la mesa de trabajo.
2. Encender el mechero Bunsen para crear un ambiente de esterilidad
3. Coger el asa de siembra, esterilizar por flameado. Esterilizar la boca del tubo de ensayo con cultivo de mucosa bucal. Introducir el asa de siembra en el tubo de ensayo poner en un lateral del tubo el asa de siembra para enfriar y coger un inóculo. Esterilizar la boca del tubo y depositar en la gradilla. Soltar el inóculo sobre el porta junto con una gota de cristal violeta y mezclar con el asa de siembra.

4. Esterilizar el asa de siembra por flameado y dejarla en la gradilla.

5. Cubrir con el cubreobjetos la muestra. Apagar el mechero Bunsen.
6. Visualizar en el microscopio óptico con el objetivo de inmersión.

5. MEDIDAS DE SEGURIDAD 

1. Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables.
2. Lavarse las manos con agua y jabón cada vez que iniciemos y finalicemos las prácticas.
3. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Desinfectar la superficie de trabajo antes y después de realizar el trabajo con lejía o alcohol (etanol 96°).
3. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama.
4. Desechar el material contaminado en los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por el fregador o en la basura común.
5. Extremar la precaución con el encendido del mechero Bunsen y su manipulación.

6. RESULTADO 

 

                                                                             x 1000
Podemos obserbar bacterias.

·         Tinción simple (azul de metileno)

1. FUNDAMENTO

Consiste en teñir la muestra problema con colorantes, permitiendo al microorganismo acumular parcialmente el colorante y poder así mejorar su visualización.

2. OBJETIVO

Visualizar la estructura y distribución de microorganismos.

3. MATERIAL Y REACTIVOS

Asa de siembra, gradilla, agua destilada, mechero bunsen, portaobjetos y  batea.

Actimel, y azul de metileno.

4. PROTOCOLO    

1. Preparar todo el material necesario en la mesa de trabajo.
2. Encender el mechero Bunsen para crear un ambiente de esterilidad
3. Coger el asa de siembra, esterilizar por flameado. Esterilizar la boca del tubo de ensayo con actimel. Introducir el asa de siembra en el tubo de ensayo con actimel, poner en un lateral del tubo el asa de siembra para enfriar y coger un inóculo. Esterilizar la boca del tubo y depositar en la gradilla. Soltar el inóculo sobre el porta y extender.

4. Desinfectar el asa de siembra por flameado y dejarla en la gradilla.
5. Pasar el portaobjetos sobre la llama para fijar la muestra de actimel.
6. Depositar colorante sobre la muestra y dejarlo durante 2 min.

7. Lavar el porta para quitar los restos del colorante y dejar secar.
8. Visualizar en el microscopio óptico con el objetivo de inmersión.

5. MEDIDAS DE SEGURIDAD 

1. Es imprescindible uso de bata de laboratorio y guantes desechables.
2. Lavarse las manos con agua y jabón cada vez que iniciemos y finalicemos las prácticas.
3. La zona de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Desinfectar la superficie de trabajo antes y después de realizar el trabajo con lejía o alcohol (etanol 96°).
3. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama.
4. Desechar el material contaminado en los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por el fregador o en la basura común.
5. Extremar la precaución con el encendido del mechero Bunsen y su manipulación.

6. RESULTADO 

 

  Los puntos azules son diplococos pero como la muestra es de actimel se deberían ver bacilos. x 1000